Desarrollan análisis paralelos para las proteínas de la enfermedad de Alzheimer en el LCR

La concentración de proteínas en el LCR puede cambiar como resultado del daño neuronal, las funciones neuronales alteradas o la tasa de flujo del LCR. Por lo tanto, representa una fuente de información exquisita sobre el estado del sistema nervioso central en condiciones fisiológicas y patológicas.

Científicos del Real Instituto de Tecnología KTH (Estocolmo, Suecia) seleccionaron 20 proteínas cerebrales enriquecidas identificadas previamente en el LCR utilizando arrays de perlas con suspensión de anticuerpos (SBA, por sus siglas en inglés) como posibles biomarcadores para la enfermedad de Alzheimer (EA) y los verificaron utilizando un enfoque ortogonal. Examinaron el mismo conjunto de 94 muestras de LCR de pacientes afectados de EA (incluidos estados preclínicos y prodrómicos), deterioro cognitivo leve (DCL), demencia sin EA e individuos sanos, que habían sido analizados previamente mediante los SBA.

Se desarrollaron veintiocho ensayos de seguimiento de la reacción en paralelo (PRM) y 13 de ellos se pudieron validar para la cuantificación de proteínas. El análisis de espectrometría de masas se realizó en un espectrómetro de masas Q-Exactive HF Quadrupole-Orbitrap acoplado a un sistema Dionex Ultimate 3000 RSLC Nano (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA) para cromatografía de fase inversa. Las muestras se inyectaron automáticamente en una columna de captura C18 seguida de una columna analítica C18 EASY-Spray.

Los perfiles de anticuerpos fueron verificados por PRM. Para siete proteínas, los perfiles de anticuerpos estaban altamente correlacionados con los resultados de PRM y GAP43, VCAM1 y PSAP se identificaron como posibles marcadores de la EA preclínica. En conclusión, el equipo demostró la utilidad de la espectrometría de masas dirigida como una herramienta para la verificación ortogonal de los datos de perfiles de anticuerpos, lo que sugiere que estos métodos complementarios se pueden aplicar con éxito para la exploración completa de los niveles de proteínas del LCR en los trastornos neurodegenerativos.

Los autores concluyeron que su estudio demostró que la aplicación de un método ortogonal como PRM para la verificación de experimentos basados en anticuerpos es un método conveniente para confirmar los perfiles de proteínas más robustos descubiertos. La comparación de los datos obtenidos por dos plataformas diferentes es un método muy poderoso, pero la información obtenida se debe interpretar a la luz del hecho de que los dos métodos, basados en diferentes principios analíticos, presentan límites peculiares en la detección de proteínas y deben ser considerados como complementarios. El estudio fue publicado en línea el 9 de marzo de 2019 en la revista Clínica Chimica Acta.

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Real Instituto de Tecnología KTH
Thermo Fisher Scientific