Inactivan virus Zika en plasma para transfusiones

Se han desarrollado varios procesos para la inactivación de patógenos durante la preparación de plasma fresco congelado (FFP) y de los concentrados de plaquetas (PLT). Entre ellos, se ha demostrado que un tratamiento fotoquímico usando un tipo de psoraleno, el amotosaleno S-59, en combinación con radiación ultravioleta A (UVA) inactiva una amplia gama de virus, bacterias y protozoos.

Un equipo de científicos quienes trabajaron con los del Instituto Louis Malardé (Papeete, Tahití, Polinesia Francesa) recolectaron unidades de plasma de donantes de sangre de los EUA para eliminar el riesgo de anticuerpos contra el ZIKV. Para evaluar la ausencia de infecciones previas por Flavivirus conocidos por circular en los EUA, como son los virus del dengue y del Nilo Occidental (DENV y WNV), cada unidad de plasma fue analizada con un kit de captura de inmunoglobulina Ig(G) dengue (Platelia, Bio-Rad; Hércules, CA, EUA) y un kit de WNV IgG clásico (Serion Elisa, Abcam, Cambridge, Reino Unido) y un kit clásico WNV IgG (Serion Elisa, Abcam; Cambridge, Reino Unido), con el fin de detectar anticuerpos contra el DENV y el WNV, respectivamente. Los 26 sueros de donantes de sangre de la Polinesia Francesa infectados por el ZIKV y los donantes de sangre asintomáticos fueron obtenidos a partir de un banco de sangre de la Polinesia Francesa.

Cuatro unidades de plasma (A, B, C y D) fueron inoculados con ZIKV. A continuación, se recolectó una muestra de cada unidad de plasma infectado (muestra pre-inactivación) y se almacenó a -80°C, hasta la determinación de los títulos virales y las cargas de ARN. Las unidades de plasma inoculadas, A, B, y C fueron tratadas con amotosaleno combinado con iluminación UVA, mientras que la unidad de plasma inoculada D, no fue solamente inactivada y fue el control positivo. Después de la transferencia a un recipiente con un dispositivo de absorción de compuesto cuya función es eliminar el amotosaleno residual y los fotoproductos libres, las muestras de cada unidad de plasma inactivada (muestras inactivadas) y del control positivo (muestra no inactivado) fueron recolectadas y almacenadas a -80°C hasta la determinación de los títulos virales y de las cargas de ARN viral.

Para la detección del ZIKV replicativo, todas las muestras pre-, post-, y no inactivadas, fueron inoculadas por triplicado en células Vero en placas de 24 pozos, y se llevaron a cabo cinco pases sucesivos. Después de cada pase, se realizó un ensayo de inmunofluorescencia indirecta para detectar células inoculadas con ZIKV, usando anticuerpos de ratón, anti-flavivirus, 4G2. Para todas las muestras de plasma (las muestras pre-, post-, y no inactivadas), el sobrenadante de las células, y las muestras de suero, se realizó una extracción de ARN utilizando un sistema de extracción y una RT-PCR en tiempo real, en un termociclador Bio-Rad CFX96.

Los títulos promedio de ZIKV y de las cargas de ARN viral en el plasma, antes de la inactivación, fueron respectivamente, log 6,57 en la dosis infecciosa 50 de cultivo de tejidos (TCID50)/mL y log 10,25 copias/mL. Después de la inactivación, las cargas promedio de ARN para el ZIKV fueron de log 9,51 copias/mL, pero los cultivos celulares inoculados con el plasma inactivado no produjeron células infectadas y no originaron ningún virus replicativo después de un pase, ni ARN viral detectable, a partir del segundo pase. Los autores concluyeron que el amotosaleno combinado con la luz UVA, inactiva el ZIKV en el plasma fresco congelado. Este proceso de inactivación es de particular interés para prevenir las infecciones por ZIKV transmitidas por transfusión de plasma en áreas tales como la Polinesia Francesa, donde varios arbovirus están co-circulando. El estudio fue publicado en la edición de enero de 2016 de la revista Transfusion.

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