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Nuevo análisis de PCR diagnostica objetivos del gen de distrofia miotónica

Por el equipo editorial de LabMedica en español
Actualizado el 26 Mar 2015
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Imagen: El termociclador para la PCR, en tiempo real, PhilisaW para acortar el tiempo-a-resultados (Fotografía cortesía de Streck).
Imagen: El termociclador para la PCR, en tiempo real, PhilisaW para acortar el tiempo-a-resultados (Fotografía cortesía de Streck).
En un estudio de prueba de principio, los científicos han desarrollado una prueba diagnóstica, convencional de PCR, que identifica específicamente los objetivos genéticos de la distrofia miotónica tipo 1 (DM1) a partir de muestras de sangre total, en 15 minutos, obviando la necesidad de purificación previa del ADN o la concentración.

Muchos diagnósticos basados en la PCR todavía se consideran largos y requieren mucha mano de obra debido a la purificación dispar, la amplificación y las etapas de detección. Los avances en las enzimas de la PCR y la química de amortiguación han aumentado la tolerancia a los inhibidores, facilitando la PCR directamente a partir de muestras crudas. Sin embargo, los protocolos de PCR directos también han empleado tradicionalmente termocicladores con tasas lentas de rampa y tiempos conservadoras de retención. El objetivo del estudio fue reducir el tiempo de preparación de la muestra y el tiempo de ensayo para una prueba genética basada en la PCR, aparejando una mezcla de enzima resistente a los inhibidores con un termociclador rápido para el análisis directo de muestras de sangre total.

Científicos de Streck, Inc. (Omaha, NE, EUA) mejoraron un ensayo de selección genética para la DM1, un trastorno genético, de triple repetición y la forma adulta más común de distrofia muscular, a través de la adaptación de una PCR convencional utilizando el “Termociclador PhilisaW” y la “Mezcla Maestra NEB NextW de Alta-Fidelidad 2X PCR”. La muestra plantilla fue sangre total al 10%. Para la detección por electroforesis en gel de agarosa se usó un Bioanalizador Agilent 2100. Como un ensayo de referencia, se usó el “Kit Genemer para Distrofia Miotónica” utilizando el protocolo de PCR, específico del kit.

La amplificación por PCR de las repeticiones cortas en tándem de la DM1 fue completada en 15 minutos usando 30 ciclos, incluyendo una lisis celular in situ/de arranque en caliente. Entre los 40 donantes seleccionados, 23 (57,5%) fueron identificados como DM1 negativos. Estos resultados fueron 100% concordantes con los resultados utilizando el kit de referencia.

El resultado es un simple ensayo de exclusión de detección para la DM1, independientemente de la preparación, por adelantado, de la muestra, con una mejoría significativa en el tiempo-a-resultados. Este método también se podría aplicar para adaptarse a otras pruebas convencionales de PCR donde el ADN genómico es el objetivo de análisis.

El artículo, por Connelly C et al., fue publicado en la edición de diciembre 2014 de la revista BMC Medical Genetics.


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