Diagnóstico serológico basado en PCR en tiempo real de la anaplasmosis granulocítica humana

La anaplasmosis granulocítica humana (AGH) es una infección transmitida por garrapatas causada por la bacteria intracelular Anaplasma phagocytophilum , un patógeno emergente. La AGH puede manifestarse como una infección subclínica; sin embargo, la mayoría de las personas sintomáticas tienen fiebre, mialgia y dolor de cabeza asociados con trombocitopenia, leucopenia y niveles elevados de transaminasas.

El diagnóstico de laboratorio de la AGH se puede establecer mediante microscopía, serología o prueba de amplificación de ácido nucleico (NAAT). La microscopía se puede utilizar para diagnosticar infecciones agudas, pero se basa en personal experimentado para visualizar grupos intragranulocíticos o mórulas en sangre periférica. La serología se usa más comúnmente para diagnosticar la AGH, y se basa principalmente en ensayos de inmunofluorescencia indirecta.

Los científicos clínicos de la Universidad de Manitoba (Winnipeg, MB, Canadá) y sus colegas analizaron dos grupos diferentes de muestras de suero para detectar el ADN de A. phagocytophilum . El primer grupo consistió en muestras de suero de personas que dieron positivo para A. phagocytophilum usando la NAAT de sangre entera. El segundo grupo consistió en muestras de suero agudas y convalecientes.

El equipo aisló ADN de 100 μL de suero mediante el uso de kits DNeasy 96 (Qiagen, Venlo, Países Bajos). El ARN transportador utilizado (Applied Biosystems/Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA) para mejorar la recuperación de cantidades bajas de ácidos nucleicos y amplificó el gen msp2 de A. phagocytophilum . Los científicos realizaron amplificaciones en un sistema ViiA7 (Applied Biosystems). También utilizaron el kit IFA IgG semicuantitativo A. phagocytophilum de Focus Diagnostics (DiaSorin, Saluggia, Italia), y títulos de IgG >1:64 indicaron infección por A. phagocytophilum actual o anterior. Definieron la seroconversión como un aumento >4 veces en el título entre muestras de suero agudas y convalecientes.

Los investigadores informaron que de 154 muestras de suero pareadas agudas y convalecientes enviadas para la serología de Anaplasma , 19 (12,3 %) muestras agudas y tres (1,9 %) muestras convalecientes dieron positivo por PCR. Los valores promedio de Ct fueron 30,3 (rango 23,7-37,5) para muestras agudas y 34,3 (rango 27,6-39,9) para muestras convalecientes. No observaron seroconversión en 10 (52,6 %) pacientes que tenían muestras de suero agudas positivas para PCR.

De las 154 muestras de suero pareadas de pacientes agudos y convalecientes, 28 (18,2 %) fueron serológicamente positivas, pero solo 11 (7,1 %) demostraron seroconversión. Los títulos aumentaron de <1:64 a 1:64 en tres muestras pareadas, 13 muestras demostraron títulos estables o decrecientes y un título se duplicó. La PCR de muestras agudas detectó 9/11 (81,8 %) pacientes que mostraron seroconversión. La PCR fue negativa usando muestras de suero agudas para dos pacientes; esas muestras de pacientes tenían títulos IFA iniciales >1:1024, lo que indica una infección previa o un muestreo retrasado. La sensibilidad de la PCR en suero fue del 81,8 % y la especificidad del 93,0 % en comparación con la seroconversión.

Los autores concluyeron que, si bien la sangre total es la muestra óptima para el diagnóstico de anaplasmosis, es posible que no esté disponible en todos los casos. La PCR analizó muestras de suero recolectadas en Canadá para la serología de Anaplasma y encontró una sensibilidad del 84,8 % al 95,8 % y una elevación promedio del umbral del ciclo de 2,8. El suero puede ser aceptable para detectar Anaplasma spp. cuando la sangre completa no está disponible. El estudio se publicó en la edición de enero de 2023 de la revista Emerging Infectious Diseases .

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