Sistemas acuosos de dos fases permiten multiplexación de inmunoensayos homogéneos

La prueba puede medir con exactitud y simultáneamente, múltiples biomarcadores proteicos que indican la presencia de enfermedades como la enfermedad de injerto contra huésped, como ocurre en el rechazo del trasplante de médula ósea y no necesita etapas de lavado además de utilizar sólo un volumen minúsculo de plasma sanguíneo.

Científicos de la Universidad de Michigan (Ann Arbor, MI, EUA) desarrollaron la prueba de proteínas, que utiliza un método de micropatrones. Para realizar el ensayo, se mezclan unos pocos microlitros de plasma sanguíneo con poli (etilenglicol) y se añaden a una microplaca en una placa personalizada de 384 pozos. A continuación, se dispensan microgotas de dextrano, que contienen pares complementarios de anticuerpos-perlas, en microcuencas dentro del pozo de la muestra. Durante la incubación de dos horas, los biomarcadores objetivos de las proteínas plasmáticas se difunden de la fase del poli (etilenglicol) a las gotitas de la fase de dextrano y quedan en medio de las perlas de anticuerpo. La microplaca se lee a continuación en un lector de placas, disponible comercialmente.

El, ensayo multiplex, libre de reacción cruzada puede detectar simultáneamente las concentraciones picomolares de cuatro biomarcadores proteicos: C-X-C motivo ligando 10 (CXCL10), CXCL9, la interleuquina (IL)-8 y la IL-6 en los sobrenadantes celulares, usando un único pozo de análisis. La utilidad clínica potencial del ensayo fue demostrada mediante la detección de biomarcadores de diagnóstico (CXCL10 y CXCL9) en el plasma de 88 pacientes en el momento del inicio de los síntomas clínicos de la enfermedad crónica de injerto contra huésped (EICH).

Shuichi Takayama, PhD, un profesor y autor principal del estudio, dijo: “Así como el aceite y el agua permanecen inmiscibles, utilizamos dos soluciones acuosas que no se mezclan entre sí. Curiosamente, estas soluciones pueden ser modeladas en matrices, mientras que los reactivos de proteínas convencionales, no-lavado, normalmente sólo se mezclan en solución. Esta capacidad novedosa hace posible, por primera vez, medir múltiples proteínas de diagnóstico a la vez en un formato de análisis, sin lavados”.

Arlyne Simón, PhD, el autor principal del estudio, dijo: “Tenemos la visión de que nuestra plataforma fácil de usar y de alta exactitud será utilizada ampliamente por los científicos académicos y clínicos para el diagnóstico así como para otras aplicaciones. Para facilitar la adopción de nuestra tecnología en la investigación y los laboratorios clínicos, diseñamos microplacas a la medida que pueden ser analizadas por los lectores de placas disponibles en el mercado”. El estudio fue publicado el 2 de junio de 2014, en la revista TECHNOLOGY.

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University of Michigan