Análisis molecular multiplex permite identificar principales lactobacilos vaginales

Se ha desarrollado un novedoso análisis multiplex cuantitativo por reacción en cadena de polimerasa (qPCR) con un solo tubo, para la identificación y evaluación cuantitativa de las cuatro principales especies vaginales de Lactobacillus.

Microbiólogos del Centro de Investigación Femeris de Salud de la Mujer (Hamilton, Nueva Jersey, EUA) evaluaron 60 muestras de frotis vaginales como parte de un estudio sobre la patogénesis de la BV. Las muestras fueron enviadas congeladas en Medio de Transporte Universal (UTM-RT) (Copan Italia SpA, Brescia, Italia) entre agosto y octubre de 2012.

El ADN de las muestras clínicas fue extraído utilizando el Mini Kit QIAamp (Qiagen, Valencia, CA, EUA) en combinación con un tratamiento previo con proteinasa K y una homogeneización mecánica. Se realizaron qPCR Multiplex y uniplex TaqMan con cebadores y sondas de Integrated DNA Technologies (Iowa City, IA, EUA) y se utilizaron instrumentos RotorGene Q de Qiagen para todos los análisis de qPCR.

La utilidad del análisis se evaluó mediante el análisis de los lactobacilos en muestras clínicas de frotis vaginales sin cultivar, recogidas de pacientes con BV y de individuos sanos. Según se confirmó con el análisis, L. Crispatus, L. jensenii y en menor medida L. gasseri, son comunes en la vagina de las mujeres sanas, mientras que el predominio del L. iners está asociado con la BV. Con el fin de confirmar los resultados de la qPCR multiplex de TaqMan, se hicieron cultivos bacterianos de las muestras vaginales y 11 muestras de frotis produjeron aislamientos de especies de Lactobacillus que fueron identificadas mediante el análisis qPCR multiplex de TaqMan. Se obtuvieron un total de 11 cepas particulares de Lactobacillus: tres de L. crispatus, dos de L. gasseri, dos de L. jensenii y cuatro de L. iners. Las denominaciones de estas especies fueron confirmadas por dos qPCR múltiplex TaqMan y qPCR uniplex SYBR verde, con 100% de concordancia.

Las autores concluyeron que su análisis había sido validado con cultivos bacterianos de lactobacilos y otras especias de bacterias comensales y patógenas que componen la flora microbiana del tracto genital inferior femenino, el ADN cromosómico humano, los controles de plásmidos sintéticos y frotis de muestras clínicas vaginales. El análisis qPCR múltiplex es un avance en la detección y cuantificación de los principales lactobacilos vaginales y podría facilitar el diagnóstico molecular de la BV y del restablecimiento de la flora microbiana vaginal después del tratamiento. El estudio fue publicado en línea el 18 de enero de 2014, en la revista Diagnostic Microbiology and Infectious Disease.


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